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產品及特點
芹菜花葉病毒(Celery Mosaic Virus，CeMV)屬于馬鈴薯病毒科馬鈴薯Y病毒屬，病毒粒體為線狀，長度為760～780 nm。芹菜花葉病毒的傳染性和存活率比較高，在自然界中主要通過汁液接觸及蚜蟲傳播，還可從寄主傷口侵入進行傳播。不同寄主被侵染后表現出不同的癥狀，苗期受侵染時，菜心生長停滯、扭曲、全株矮小甚至枯死，被侵染芹菜產量和品質會受到明顯影響。芹菜花葉病毒會嚴重減低芹菜產量，甚至使之喪失商品價值，因此快速檢測芹菜花葉病毒具有重要的意義。為此，本公司以探針法qRT-PCR技術為基礎開發了芹菜花葉病毒的檢測試劑盒，它具有下列特點：
芹菜花葉病毒(Celery Mosaic Virus，CeMV)屬于馬鈴薯病毒科馬鈴薯Y病毒屬，病毒粒體為線狀，長度為760～780 nm。芹菜花葉病毒的傳染性和存活率比較高，在自然界中主要通過汁液接觸及蚜蟲傳播，還可從寄主傷口侵入進行傳播。不同寄主被侵染后表現出不同的癥狀，苗期受侵染時，菜心生長停滯、扭曲、全株矮小甚至枯死，被侵染芹菜產量和品質會受到明顯影響。芹菜花葉病毒會嚴重減低芹菜產量，甚至使之喪失商品價值，因此快速檢測芹菜花葉病毒具有重要的意義。為此，本公司以探針法qRT-PCR技術為基礎開發了芹菜花葉病毒的檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經過優化，分析靈敏度高，可以達到100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據芹菜花葉病毒RNA高度保守區設計，不會跟其他生物的RNA發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。
6. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法qRT-PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。
規格及成分
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成分 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL(本色蓋） |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL(綠色蓋） |
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流腦A,B,Y群探針法qPCR引物-探針混合液 |
150μL(棕色管） |
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流腦A,B,Y群探針法qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL(黃色蓋） |
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使用手冊 |
1份 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋PCR陽性對照以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。本陽性對照由流感A、B和Y群專一性的三種DNA片段組成。
稀釋PCR陽性對照以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。本陽性對照由流感A、B和Y群專一性的三種DNA片段組成。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照（試劑盒提供），充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL的陽性對照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是樣品制備PC（樣品制備陽性對照），一個是樣品制備NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為樣品制備PC。另外用水作為樣品制備NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數DNA提取試劑盒兼容。
Probe qPCR反應20μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號管中的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為描述操作步驟，
數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。一次實驗可以得到三種靶分子的標準曲線，FAM通道得到的數據是A群的，HEX通道得到的數據是B的，ROX通道得到的數據是Y群。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于45。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于或等于40。對待測樣品，如果其Ct大于或等于45則為陰性，如果小于或等于40則為陽性。如果在40-45之間，則重復一次。若重復結果Ct值小于45，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。一次實驗可以得到三種靶分子的Ct，FAM通道得到的數據是A群的，HEX通道得到的數據是B的，ROX通道得到的數據是Y群。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
