一、基礎(chǔ)信息
試劑盒有 96T 和 48T 兩種規(guī)格，保質(zhì)期 6 個(gè)月（以包裝標(biāo)簽為準(zhǔn)）。用于體外定量測(cè)血清、血漿等生物液體中 IL - 6 濃度，僅適用于科研，不可用于臨床診斷。
其靈敏度達(dá) 0.1pg/mL，對(duì) IL - 6 特異性強(qiáng)，與類似物幾乎無交叉反應(yīng)。重復(fù)性佳，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 10%，檢測(cè)范圍在 1.5pg/mL - 48pg/mL。
二、檢測(cè)原理
采用雙抗體夾心法，就像精心策劃的 “分子抓捕游戲”。先在酶標(biāo)板上布置抗 IL - 6 抗體 “陷阱”，實(shí)驗(yàn)時(shí) IL - 6 會(huì)主動(dòng) “落網(wǎng)” 與抗體結(jié)合，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體，形成穩(wěn)固 “組合”。洗板除去游離成分后，加顯色底物 TMB，在辣根過氧化物酶催化下，TMB 先變藍(lán)，加終止液后變黃，顏色越深，IL - 6 越多。最后用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)吸光度（OD 值）算濃度。
三、實(shí)驗(yàn)必備物品
1、450nm 酶標(biāo)儀，負(fù)責(zé)精準(zhǔn)讀取數(shù)據(jù)。
2、不同量程加樣器及槍頭（0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL），助力精確加樣。
3、37℃恒溫箱，提供穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
4、蒸餾水或去離子水。
四、檢測(cè)前準(zhǔn)備
1、提前 1 小時(shí)從冰箱取出試劑盒和樣本，室溫平衡。
2、濃縮洗滌液若有結(jié)晶，室溫溶解后，20ml 濃縮液加蒸餾水或去離子水配成 400ml 洗滌液，余液放回 4℃。20× 洗滌緩沖液按 1：20 用蒸餾水稀釋。
五、樣品收集方法
血清：全血室溫放 2 小時(shí)或 4℃過夜，2000prm 離心 20 分鐘，取上清，用無內(nèi)毒素試管。
血漿：用 EDTA 鈉鹽抗凝，采集后 30 分鐘內(nèi)，2000prm 離心 15 分鐘，取上清，避開溶血、高血脂樣本。
組織勻漿：PBS（0.01M，pH = 7.4）洗組織，稱重剪碎，按 1：9 加 PBS（可加蛋白酶抑制劑），冰上研磨，可超聲破碎或反復(fù)凍融，5000prm 離心 5 - 10 分鐘，取上清。
細(xì)胞提取液：貼壁細(xì)胞冷 PBS 洗、胰蛋白酶消化，2000prm 離心 5 分鐘收集；懸浮細(xì)胞直接離心收集。細(xì)胞冷 PBS 洗 3 次，每 1×10?個(gè)細(xì)胞加 150 - 200μL PBS 重懸，反復(fù)凍融破碎，2000prm 離心 10 分鐘，取上清。
細(xì)胞培養(yǎng)上清等：2000prm 離心 20 分鐘，取上清。
六、樣品注意事項(xiàng)
1、1周內(nèi)檢測(cè)存 4℃，否則按用量分裝， - 20℃以下凍存，避免反復(fù)凍融，溶血樣本勿用。
樣品濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值需稀釋，先做預(yù)實(shí)驗(yàn)定倍數(shù)。
2、化學(xué)裂解液制備樣本可能致測(cè)值偏差，部分重組蛋白可能與抗體不匹配無法檢測(cè)。
七、操作步驟
1. 算好預(yù)包被板條數(shù)，取出所需放 96 孔框架，余板密封存 4℃。
2. 試劑盒和樣本室溫（25 - 28oC）平衡 60min。
3. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、樣本、空白孔。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品孔加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待測(cè)樣本 50μL（可稀釋），空白孔加樣本稀釋液 50μL。
5. 各孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記檢測(cè)抗體 100μL，封板膜封孔，37℃溫育 45min。
6. 棄液拍干，每孔加 350μL 洗滌液，靜置 20s，甩去拍干，重復(fù) 5 次（可用洗板機(jī)）。
7. 每孔加底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
8. 每孔加終止液 50μL，15min 內(nèi) 450nm 測(cè) OD 值。
八、結(jié)果計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)品和樣本設(shè)復(fù)孔取平均值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為縱坐標(biāo)，OD 值為橫坐標(biāo)畫標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2 越近 1 越好）。通過樣品吸光度和標(biāo)準(zhǔn)曲線算濃度（可用軟件），稀釋過的樣品濃度需乘稀釋倍數(shù)。
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