購物車
幫助
021-54845833/15800441009
豬輪狀病毒探針法RT-LAMP試劑盒
產品及特點
豬輪狀病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是豬群中常見的引起腹瀉性疾病的主要病原。 幼齡仔豬易感，1～4 周齡仔豬發 病率超過 80%，死亡率達 7% ～20%，癥狀也較嚴重。同時，由于該病常與其他疾病混合感染，使病情加重，導致死亡率增高，給養殖戶帶來嚴重的經濟損失。因此PRV的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此，本公司開發了本檢測試劑盒，它具有下列特點：
產品及特點
豬輪狀病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是豬群中常見的引起腹瀉性疾病的主要病原。 幼齡仔豬易感，1～4 周齡仔豬發 病率超過 80%，死亡率達 7% ～20%，癥狀也較嚴重。同時，由于該病常與其他疾病混合感染，使病情加重，導致死亡率增高，給養殖戶帶來嚴重的經濟損失。因此PRV的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此，本公司開發了本檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒RNA樣品。
2. 恒溫擴增，可以不需要貴重的熒光PCR等貴重儀器。
3. 含探針，可以進一步提高專一性。
4. 檢測靈敏性可以達到100拷貝/反應左右。
5. 特異性高，擴增引物和檢測探針均根據豬輪狀病毒RNA保守序列設計，不會跟其他生物的RNA發生交叉反應。
6. 一般30分鐘內出結果，比RT-PCR快。
7. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結果。
8. 提供內參，便于識別假陰性。
9. 本產品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
10. 上樣量大，對20 μL的反應體系，樣品加樣量高達到13μL。
11. 內含的dUTP-UNG可防交叉污染。
12. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光RT-LAMP擴增。
13. 只可用于科研。
規格及成分
規格及成分
|
成分 |
規格 |
包裝 |
|
RT-LAMP MasterMix（探針法，待加酶） |
200μL |
0.5mL本色蓋 |
|
逆轉錄酶-擴增酶混合液 |
100μL |
0.5mL紅蓋管 |
|
20×豬輪狀病毒RT-LAMP引物探針混合液干粉 |
50次 |
0.5mL白色管 |
|
豬輪狀病毒RT-LAMP陽性對照 |
2.5×10E6拷貝 |
0.5mL黃蓋管 |
|
豬輪狀病毒RT-LAMP內參 |
5×10E6拷貝 |
0.5mL綠蓋管 |
|
使用手冊 |
1份 |
無 |
|
本產品采購五孔盒包裝 |
||
|
注 意：首次使用本產品的時候，需要在引物探針混合液干粉管中加入60uL的自備超純水，在陽性對照管和內參管中分別加入250uL和500uL超純水，使得陽性對照和內參的濃度均為1×10E4拷貝/μL。這些溶液用后還有剩余的需要放-20℃保存，陽性對照和內參由于是高濃度的模板，容易污染沒有模板的Mix、引物探針混合液和水，因此需要在專門的場地進行稀釋。 |
||
使用方法
樣品RNA的制備
樣品RNA的制備
1. 用自選方法純化樣品RNA，本試劑盒跟市場上大多數RNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10μL本試劑盒提供的陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水充當，總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣品體積一樣，NC用水替代。
3. N+2個樣品的每個樣品在純化前，每個都要加入本試劑盒提供的10μL豬輪狀病毒RT-LAMP內參（1×10E4拷貝/μL），相當于每個樣品在進行核酸純化前，含有1×10E5個拷貝的內參分子。
探針法熒光RT-LAMP反應20μL體系
4. 注意：第一次使用一個新的試劑盒時，必須先將100uL逆轉錄酶-擴增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（探針法，待加酶）中，蓋上蓋子后輕柔顛倒1分鐘混勻，然后再取用。
5. 反應設置：如果有N+2個RNA純化樣品，則設置N+5個RT-LAMP擴增，增加一個陰性對照、一個內參擴增對照和一個陽性對照。
結果分析
1. 判斷實驗有效性：擴增陰性對照必須沒有FAM信號的擴增（擴增是指Ct在40以內，熒光信號呈現標準的S型擴增曲線。任何一個不滿足此兩個條件，均判讀為無擴增。下同），擴增陽性對照必須有FAM信號的擴增，否則整個實驗無效，需要分析原因。擴增陰性對照如果有擴增，表示實驗試劑或環境有模板DNA的污染。擴增陽性對照沒有FAM信號的擴增表示試劑盒或擴增設備或操作有問題，需要分別排查。找到原因并解決問題后方可重啟實驗。
2. 如果實驗有效，則可以分析N+2個樣品的情況。
情況1、FAM信號有擴增，則此樣品應判為陽性，不論HEX信號有無擴增。
情況2、樣FAM信號無擴增，但HEX信號有擴增，則此樣品應判為陰性；
情況3、FAM信號和HEX信號均無擴增，此樣品應判為假陰性（可能原因之一是此樣品中有抑制物，也可能核酸在純化過程中丟失）。此樣品需要稀釋不同倍數后再測或/和重新進行核酸制備。
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
