NADPH氧化酶(NAO)活性試劑盒50管/48樣
試劑盒組分與配制
測定原理
NADPH 氧化酶(NAO)是一個典型的膜蛋白,催化 NADPH 氧化生成 NADP+,并將電子傳遞給氧原子從而產生超氧陰離子。廣泛存在于動物、植物和真菌中。該酶異常可導致人慢性肉芽腫病(GCD),在植物中,該酶與其抗病性和各種脅迫有密切關系。
NADPH 氧化酶(NAO)將 NADPH 氧化為 NADP+的同時生成超氧陰離子(O2 .- ),接著與顯色劑反應生成水溶性的黃色物質。對照通過添加該酶的特異性抑制劑 DPI 排除背景值。最終檢測生成的有色物質在 450nm 處的吸光值,即可計算得出 NAO 酶活性大小。
所需的儀器和用品
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、水浴鍋和蒸餾水。
試劑盒組分與配制
提取液:液體 60mL ×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 22mL ×1 支,-20℃保存;
試劑二:液體 0.6mL ×1 支,-20℃避光保存;
試劑三:粉體 ×2 支,-20℃避光保存;
試劑四:液體 3mL ×1 支,-20℃避光保存;
注意
預實驗的意義
注意
正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。
預實驗的意義
比色法檢測試劑盒預實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現的實驗現象或問題,以便于及時作出調整;
5、通過3 - 5組預實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍,指導實驗樣本稀釋比例。
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