谷氨酰胺(Gln)活性試劑盒分光法/24樣
測定原理
自備實驗用品及儀器
試劑盒組分與配制
測定意義
谷氨酰胺(Gln)是蛋白質合成的重要組成部分,在生物體內主要以游離態和結合態兩種狀態存在,游離谷氨酰胺在機體代謝過程中起著重要作用,同時也是三羧酸循環中α-酮戊二酸的主要來源,在能量代謝中發揮重要作用,可通過糖酵解和三羧酸循環途徑參與能量的產生與供應。
測定原理
游離谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下轉變為谷氨酸,谷氨酸脫氫酶催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,在1-mPMS作用下,WST-8能夠與NADH反應生成水溶性Formazan,產物在450 nm處具有特征吸收峰,根據吸光值變化即可定量檢測谷氨酰胺的含量。
自備實驗用品及儀器
臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽和蒸餾水。
試劑盒組分與配制
提取液:液體30 mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1支,-20℃避光保存。使用時分裝凍存,避免反復凍融。
試劑二:液體1mL×1支,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水混勻溶解,分裝凍存,避免反復凍融。
試劑四:液體2mL×1瓶,-20℃避光保存。分裝凍存,避免反復凍融。
試劑五:液體1.5mL×1瓶,-20℃避光保存。
試劑六:液體1.5mL×1瓶,-20℃避光保存。
試劑七:液體30mL×1瓶,4℃保存。
標準品:粉劑×1瓶,4℃避光保存。
注意
注意
正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。
預實驗的意義
預實驗的意義
比色法檢測試劑盒預實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現的實驗現象或問題,以便于及時作出調整;
5、通過3 - 5組預實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍,指導實驗樣本稀釋比例。
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