谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性試劑盒分光法/24樣
測定原理
自備實驗用品及儀器
試劑盒組分與配制
測定意義
GSH-Px是谷胱甘肽氧化還原循環中催化還原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,從而保護生物膜免受ROS的損害,維持細胞的正常功能;而且具有保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。
測定原理
GSH-Px活性以催化GSH氧化的反應速度,及單位時間內GSH減少的量來表示,GSH和DTNB反應在GSH-Px催化下可生成黃色產物,于412nm下有最大吸收峰,反應液黃色越淺,GSH-Px活性越高,反應液黃色越深,GSH-Px活性越低。
自備實驗用品及儀器
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、研缽、可調節移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑盒組分與配制
提取液:液體30 mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10mL蒸餾水溶解。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加入6mL蒸餾水。
標準品:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10mL蒸餾水溶解即為1μmol/mL GSH。
注意
注意
正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。
預實驗的意義
預實驗的意義
比色法檢測試劑盒預實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現的實驗現象或問題,以便于及時作出調整;
5、通過3 - 5組預實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍,指導實驗樣本稀釋比例。
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