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ATP活性試劑盒(WST顯色法)微量法/48樣
測(cè)定原理
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
試劑盒組分與配制
測(cè)定意義
ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。
測(cè)定原理
己糖激酶（HK）催化葡萄糖和ATP生成6-磷酸葡萄糖，后者在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下生成NADPH。NADPH在電子耦合試劑存在下，將WST-8還原為水溶性橙黃色的formazan，該產(chǎn)物在450nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑盒組分與配制
酸性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體0.75mL×1支，-20℃避光保存；
試劑二：液體 10mL×1瓶，-20℃避光保存；
試劑三：液體0.75mL×1支，-20℃避光保存；
試劑四：液體1 mLx1，-20℃避光保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑x1支，-20℃避光保存；(臨用前加入985.8μL蒸餾水配成10μmol/mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后稀釋20倍配置成0.5μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液)
注意
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
